聚合酶链反应（PCR），即DNA的扩增，是一种用于分子生物学的成熟过程。PCR技术在医学和传染病诊断、法医学和研究应用方面取得了长足的进步。关于治疗方案和临床疗效的决定通常基于患者细胞的DNA和RNA分析。确保适当的污染控制可确保临床医生获得最佳结果。
聚合酶链反应污染最常见的原因:
- 不正确的实验室设置和工作流程
- 操作员污染
- 样品分离失败
- 实验室设备灭菌不当
建立实验室以优化PCR工作流程
建立适当的实验室环境和建立单向的工作流程是防止PCR污染的两种方法。为确保适当的设施控制，质量保证人员将根据实验室空间和可用设备的大小建立文件化的标准规程。人员应经过仔细的培训，并有权使用书面程序。
这个单向工作流涉及以下5个最佳实践:
- 为每个PCR反应步骤建立单独的工作区域或房间
- 不要将之前处理过的管送回之前的工作区域或房间
- 主混合料应在反应容器中制备和等分，并移至相邻的隔离区域
- 制备主混合物的区域不得存在DNA模板
- 完成扩增的反应管不得与未扩增的样品或未使用的试剂一起储存
虽然大型实验室可以为每个PCR反应在设施内创建单独的房间，但小型实验室使用PCR罩或类似的死风箱(没有鼓风机的罩)来创建防止污染所需的分离。
避免操作人员污染PCR工作站
在任何实验室中，造成污染的最大因素是操作人员。为了减轻这种情况，操作人员必须遵守既定的单向工作流程，并保持适当的实验室设备。遵循以下提示，以消除操作人员污染:
- 工作人员必须始终佩戴手套，并定期更换
- 操作人员必须努力保持工作表面的清洁
- 操作人员必须遵守建立的单向工作流程协议
PCR头套，消毒和操作人员安全
PCR抽油烟机可配备抗菌紫外灯，该灯可在设定的时间间隔内工作，对工作环境进行消毒。UV- c暴露是有害的，所以工作人员在使用UV灯的时候应该离开房间。然而，如果这是不可能的，实验室工作人员在这些灯下工作时必须始终穿戴适当的防护装备。重要的是，配备UV灯的罩是由适当的抗紫外线材料构成的。
- PCR反应应在单独的PCR反应罩中进行
- 应使用1:10或1:20稀释的漂白剂对整个机罩工作表面以及移液管进行消毒，然后用70%乙醇进行冲洗
- 每个PCR反应罩应包含专用设备（移液管、离心机、塑料实验室器具），不应移除和/或转移到另一个罩中
PCR罩中推荐的移液器
选择带有屏障尖端的正位移移液管，以防止从一个样品带入下一个样品。这些移液管是处理挥发性液体和高粘度样品的理想选择，因为它们的一次性微型注射器头。与空气置换移液管相比，容积式移液管不仅具有更高的准确度，而且提供了更好的样品保护。
结论
PCR反应中的污染可以通过遵循基本的实验室最佳做法和结合一些针对敏感PCR应用的专门技术来控制。理想情况下，用于研究遗传物质的实验室设备不应用于其他实验;即使有适当的清洁规程，仍然有交叉污染的机会。根据详细的、文件化的协议提高效率和准确性。
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照片作者gemmerich,
